### 哺乳动物蛋白提取试剂盒概述

本试剂盒的组成包括：5X缓冲液10ml、5X氯化钠10ml、5X SDS10ml、5X DOC10ml、5X NP-40 10ml、20X PBS10ml以及蛋白酶抑制剂混合物0.5ml。此试剂盒可在常温下保存，唯独蛋白酶抑制剂混合物需要保存在-20°C，保质期为24个月。

### 提取步骤

1. **准备工作**：根据5X缓冲液、5X氯化钠、5X SDS、5X DOC和5X NP-40的比例，以1:1:1:1:1（v/v）配置细胞裂解缓冲液。使用1ml细胞裂解缓冲液进行106~107个细胞或5~20mg组织的蛋白提取。在使用前务必加入10μl蛋白酶抑制剂混合物。

2. **清洗细胞或组织**，使用细胞裂解缓冲液处理：
   a. **贴壁细胞**：先去除生长培养基，使用PBS缓冲液清洗细胞两次，然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个细胞/ml）。将细胞放入冰袋，摇床孵育30分钟，期间多次重悬细胞，最后刮下并收集裂解液。
   b. **悬浮细胞**：进行700xg离心5分钟，去除上清液。用PBS清洗细胞两次，4°C下进行离心以去除上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个细胞/ml），并在冰袋中摇床孵育30分钟。
   c. **组织样本**：将组织切割成小块，使用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），然后将样品（含细胞裂解缓冲液）转移至预冷微量匀浆器内，均质30~50次。请注意，均质过程对靶蛋白的功能完整性极为重要。在4°C下以12,000xg离心10分钟以沉淀细胞碎片，或者进行高速离心100,000xg，离心时间为45分钟，获得蛋白质溶液。

3. **保存**：将含蛋白质的上清液转移至冷冻管中，可以在冰上保存以便立即使用，或将蛋白质溶液保存在-70°C的环境中，以确保其稳定性与纯度。选择EVO视讯的试剂盒，保证您每一步的提取过程都精准无误，为您的生物医学研究保驾护航。