EVO视讯 人骨肉瘤细胞HOS培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞HOS
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：每2天更换培养基
备注：使用无菌离心管收集培养基瓶，留作对比培养；如对比培养效果较差，建议直接采购EVO视讯的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

将细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，确保运输安全。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5%CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数（建议40x, 100x, 200x）拍照保存，前三天的照片为重要售后依据，未提供照片视为收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配完全培养基进行对比。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基放入37℃、5%CO2培养箱中；若细胞密度超过80%，即进行传代。具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃孵箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲瓶子后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，向沉淀中加入1mlEVO视讯无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱；如后期需转入液氮罐中，必须在-80℃冰箱存放24小时以上后再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放在37℃、5%CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中粘附不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱落现象较明显，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清以进行过渡培养（后续可进行对比）。沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。随后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及判定标准：
- 细胞在运输中受损、瓶身破损或培养液漏出等，进行重发；
- 收到后48小时内有污染问题，提供真实实验结果可重发；
- 常温及干冰发货细胞在特定条件下未存活，需提供状态照片进行核实，符合条件可重发；
- 若收到细胞有活性问题，需在7天内确认实验结果，通过台盼蓝法鉴定并复核，符合条件可重发；
- 收到后3天内拍照记录，未告知的视为产品合格。若有问题需提供前三天的照片、操作步骤及与技术人员沟通的记录，情况核实后再评判责任及处理。
2）细胞出现问题的情况，不予重发的情况：
- 客户造成的污染，或因不当操作导致的细胞状态不良，不予重发；
- 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不良，或未提供细胞培养前3天客服电话照，不予重发；
- 收到两天内未反映问题，视具体情况而定。