EVO视讯对于RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞的培养提供了详细的说明，以帮助研究人员顺利进行实验。以下是细胞培养的最佳实践和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议首次传代比例为1:2。传代后，每2天更换培养基。备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果效果不佳，推荐直接购买EVO视讯的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

一旦收到细胞，建议尽快将其培养至良好状态，并用完全培养液灌满细胞瓶并密封。这是运输细胞的最佳处理方式。在处理过程中，请使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行其他操作。观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的细胞图片（最佳为40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后依据。如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 如果细胞未超过80%汇合度，请将培养液收集到离心管中，留5ml培养基放入37℃、5% CO₂孵箱；

2. 当细胞密度超过80%时，采取以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加1-2ml消化液（025%胰蛋白酶-053mMEDTA），置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶并加入超过5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清。
4. 补加1-2mL完全培养基重悬细胞，并按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的025%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，及时加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其脱落后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5min。
4. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的EVO视讯无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，请在-80℃存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直到完全无结晶；然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将解冻的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，接种于T25培养瓶，放在37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。为防止这种情况，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行离心处理，然后加入胰酶进行消化。在重悬后，再进行分瓶传代培养。

五、售后条款

如果细胞出现问题，以下情况可满足重发条件：

• 运输过程中出现丢失、瓶身破损、严重漏液等问题。
• 收到产品后48小时内报告污染问题，经核实可重发。
• 常温发货细胞静置后、或冻存发货细胞复苏后24小时未存活，并提供清晰的状态照片。
• 出现污染问题，需提供前三天的培养照片和操作详细步骤，经技术人员判定责任后可重发。

不予重发的情况包括以下几点：

• 客户自行造成细胞污染。
• 客户不正确操作导致细胞状态不佳。
• 非本库推荐的培养体系导致的细胞状态不佳。
• 在收到后2天内未告知问题。

如需更多信息，请访问我们的官方网站了解EVO视讯的产品和服务。