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EVO视讯:生物医疗领域的凝胶渗透色谱GPC原理及操作指南

来源:穆树春 日期:2025-03-12

在生物医疗领域,对各类样本中的农药残留和半挥发性有机物进行分析时,样品萃取物中通常含有大分子物质。如不去除这些杂质,可能会导致色谱柱的分离效率降低,同时缩短进样口和色谱柱的使用寿命,最终影响数据分析结果。因此,进行样本分析前,必须实施有效的净化前处理。这一点在传统前处理过程中的耗时和溶剂消耗上表现尤为明显,因此,使用品牌的凝胶渗透色谱(GPC)逐渐成为该领域的一个重要趋势。

EVO视讯:生物医疗领域的凝胶渗透色谱GPC原理及操作指南

凝胶渗透色谱(GPC),又称体积排斥色谱(SEC),是利用溶剂作为流动相,通过多孔填料(如多孔硅胶或树脂)进行样品分离的一种液相色谱技术。GPC属于液相色谱的一种,其分离部件是一个以多孔凝胶作为载体的色谱柱,凝胶表面和内部具有多个大小不一的孔洞。在GPC系统中,组成部分包括泵系统、自动进样系统、凝胶色谱柱、检测系统以及数据采集和处理系统。GPC的分离原理基于“空间排斥效应”,利用外力使样品流动相(气体、液体或超临界流体)通过固定相表面进行分离。样品成分与固定相的相互作用不同,导致它们以不同速率流出,从而实现组分的分离,使得每种组分可进行定性和定量分析。

针对谱图的表示方法,柱后流出物浓度随保留值的变化显示出高聚物的平均分子量及其分布。根据所使用凝胶的性质,GPC可以分为水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和有机溶剂的凝胶渗透色谱法。该方法仅依据尺寸大小进行分离,大组分会先被洗提,而小组分因可以进入凝胶孔道而滞留时间较长,从而更慢地被洗提出来。相较于其他色谱法,这为分析分子提供了不同的筛选机理。

在应用范围方面,凝胶过滤色谱适合分析水溶液中的多肽、蛋白质以及生物酶等生物分子,而凝胶渗透色谱则主要用于高分子(如聚乙烯、聚丙烯等)分子量的测定。选择GPC方法的原因包括:相对分子量分布对聚合物性质产生显著影响;而经典方法在相对分子质量分布测定上具有局限性。GPC的应用不仅改善了检测条件,也为聚合物相对分子质量及其分布的快速测定提供了一种有效技术。

在使用中,用户常常会遇到一些问题。首先,选择适当的溶剂非常关键,它需要能够溶解多种聚合物,同时不腐蚀仪器,并与检测器匹配。此外,将激光光散射技术与凝胶色谱结合使用,可以同时获得浓度谱图和散射光强度谱图,从而计算分子量分布曲线及平均分子量。对于样本的准备,需确保严格的除尘,以保证光散射实验的成功。在溶剂和样品制备过程中,应使用经过超滤的溶剂,并对使用的器具进行充分清洗。

在选择GPC色谱柱时,应根据样品溶剂选择合适的柱子系列,同时依据样品的分子量范围进行选择,以确保在排阻和渗透极限范围内进行测定。此外,对载体的要求包括良好的化学和热稳定性、适当的机械强度及较小的流动阻力等。针对进样体积,推荐在50-100微升之间,并确保浓度在0.05%-0.5%之间。

最后,在进行GPC系统的平衡时,需连接管路并替换流动相后再安装色谱柱。同时,在分析开始前要用流动相冲洗检测器流路,以确保基线稳定,并在达到平衡值后再进行样品分析。使用的GPC,不仅可以提高分析效率,还能确保结果的准确性。

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