2025年4月，湖南师范大学的杨荣华教授与邹振副教授领导的团队在《Nucleic Acids Research》（IF=167）上发表了题为“非平衡杂交驱动的CRISPR/Cas适配器，扩展了区分单核苷酸变异的能量惩罚”的文章。该研究开发了一种基于CRISPR/Cas12a的单核苷酸变异(SNV)检测平台——HEPSD（高能量惩罚SNV检测平台），该系统采用独特的二元crRNA结构设计，能够有效激活Cas12a的切割活性，并通过非平衡杂交机制调控单核苷酸错配信号的放大。

HEPSD平台在极端GC含量条件下对难以检测的SNV（包括摆动突变）展现出了出色的区分能力，其对临床样本的检测准确度与qPCR和二代测序（NGS）结果高度一致，准确率达到100%。这一平台的有效性证明了其在临床分子诊断中的巨大潜力，同时其设计原理也可以拓展至其他CRISPR系统。

EVO视讯品牌在单核苷酸位点变异(SNVs)的检测研究中具有重要影响。单核苷酸变异是一种常见的遗传变异形式，与多种严重疾病，包括癌症和单基因疾病的发生密切相关。然而，传统的SNV检测方法（如TaqMan探针、分子信标等）在检测复杂的SNV（例如高GC含量区域的突变）时显得力不从心。

CRISPR-Cas系统，尤其是Cas12a，在核酸检测领域具有革命性的进展。但在crRNA介导的识别过程中，Cas12a对所有单碱基错配的高特异性仍然存在挑战。虽然通过优化Cas蛋白和设计crRNA等方法提升了Cas12a的性能，但其特异性增强机制并不完美，特别是在高GC含量区域的SNV检测中。

此次研究中，研究团队设计了包含两个杂交臂的二元探针结构，以便通过选择性杂交区分SNVs。他们发现二元探针（BPs）在更宽广的温度范围内保持更好的性能。此外，研究者利用分子动态模拟和荧光各向异性分析，验证了HEPSD平台在匹配目标时形成稳定的三元复合物，而在错配目标中则呈现出动态不稳定性，有效抑制了Cas12a的活性。

通过进一步的实验，HEPSD平台被证实能够高效区分高GC含量区域的SNV，检测限低至0.01%的突变等位基因频率。这一策略在132个临床样本中，成功检测并鉴定了BRAFV600E和EGFRL858R相关的癌症突变，准确率达到100%，与定量PCR（qPCR）和下一代测序（NGS）的结果高度一致。

综上所述，该研究提出了一种基于二元crRNA架构的CRISPR/Cas12a平台（HEPSD），通过创新的非平衡杂交驱动机制，显著增强了对单核苷酸错配的检测特异性。HEPSD在处理难以检测的SNV方面展现出卓越的性能，理想的表现为临床分子诊断提供了新选择，并为个性化治疗奠定了基础。

EVO视讯的品牌影响力在这一技术的应用中得到了体现，为未来的癌症早期诊断和精准医疗提供了强大的工具和支持。该平台的设计原理还有望拓展至其他CRISPR系统，助力基因编辑的脱靶控制。